IgG Avidity in Samples Collected on Filter Paper: Importance of The Early Diagnosis of Congenital Toxoplasmosis / Avidez de IgG em amostras coletadas em papel filtro: Importância no diagnóstico precoce da toxoplasmose congênita

Abstract Objective The purpose of the present study is to standardize and evaluate the use of the immunoglobulin G (IgG) antibody avidity test on blood samples from newborns collected on filter paper to perform the heel test aiming at its implementation in ongoing programs. Methods Blood samples from newborns were collected on filter paper simultaneously with the heel prick test. All samples were subjected to immunoglobulin M IgM and IgG enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). Peripheral blood was collected again in the traditional way and on filter paper from newborns with high IgG levels (33). Three types of techniques were performed, the standard for measuring IgG in serum, adapted for filter paper and the technique of IgG avidity in serum and on filter paper. The results of the avidity test were classified according to the Rahbari protocol. Results Among the 177 samples, 17 were collected in duplicate from the same child, 1 of peripheral blood and 1 on filter paper. In this analysis, 1 (5.88%) of the 17 samples collected in duplicate also exhibited low IgG avidity, suggesting congenital infection. In addition, the results obtained from serum and filter paper were in agreement, that is, 16 (94.12%) samples presented high avidity, with 100% agreement between the results obtained from serum and from filter paper. Conclusion The results of the present study indicate that the avidity test may be another valuable method for the diagnosis of congenital toxoplasmosis in newborns.

Resumo Objetivo O objetivo do presente estudo é padronizar e avaliar a utilização do teste de avidez de anticorpos imunoglobulina G (IgG) em amostras de sangue de recémnascidos (RNs) coletadas em papel filtro para a realização do teste do pezinho visando a implementação nos programas já vigentes. Métodos Foram coletadas amostras de sangue de recém-nascidos em papel filtro simultaneamente ao teste do pezinho. Em todas as amostras, foram realizados os testes imunoenzimáticos (ELISA) imunoglobulina M (IgM) e IgG. Dos RNs que apresentaram altos índices de IgG (33), foi novamente coletado sangue periférico da forma tradicional e em papel filtro. Foram realizadas técnicas padrão para a dosagem de IgG em soro, adaptadas para papel filtro, e a técnica de avidez de IgG em soro e em papel filtro. Os valores obtidos para o teste de avidez foram classificados de acordo com o protocolo de Rahbari. Resultados Dentre as 177 recoletas, em 17 amostras foi realizada a coleta simultânea de sangue periférico e papel filtro da mesma criança. Nesta análise, 1 (5,88%) das 17 amostras coletadas em duplicata obteve também baixa avidez de IgG, sugerindo infecção congênita da criança, e houve concordância entre os resultados obtidos em soro e em papel filtro: 16 (94,12%) das amostras apresentaram alta avidez, com concordância de 100% entre os resultados obtidos em soro e em papel filtro. Conclusão Os dados do presente trabalho evidenciam que o teste de avidez poderá ser mais um método valioso a ser utilizado no diagnóstico da toxoplasmose congênita em RNs.

Análisis de beta-glucosidasa en sangre seca recolectada en papel filtro (DBS), reporte de un nuevo método aplicado a población control y pacientes con sospecha de enfermedad de Gaucher / Beta-Glucosidase analysis in collected dried blood spots (DBS), report of a new method applied to the control population and patients with suspicion of Gaucher disease / Análise de β-glucosidase em sangue seco coletado em papel filtro (DBS), relatório de um novo método aplicado à população controle e a pacientes com suspeita de doença de Gaucher

Resumen: La enfermedad de Gaucher (GD) es el trastorno de almacenamiento lisosomal que se caracteriza por la deficiencia en la actividad enzimática de la β-glucosidasa (BGLU), lo que produce la acumulación de glucosilceramida en las células. Su diagnóstico se orienta a la valoración de la enzima en los leucocitos afectados. Se han realizado estudios en DBS para la actividad de BGLU en el seguimiento de poblaciones de alto riesgo; sin embargo, presentan interferencias relacionadas a leucopenias severas o expresión aumentada de la isoforma neutra de la enzima BGLU, molécula no relacionada con GD. El objetivo de este estudio fue la estandarización de un método de tamizaje en DBS (punch: 5 mm) con el uso de 4-metilumbeliferil-β-D-glucósido y conduritol-β-epóxido. Se analizaron muestras de DBS de 395 individuos con sospecha clínica (población de alto riesgo o AR), 151 controles y 16 pacientes afectados, usando la elución de un corte de 5 mm (≈10 μl de sangre) en 300 μl de Tritón X-100/(0,5 %). Como resultados, se obtuvieron los rangos, AR: 0,84-26,92 nmol/ml/h, controles: 3,56- 8,92 nmol/ml/h (M = 5,56, DS = 1,15) y pacientes confirmados con GD: 0,82- 2,88 nmol/ml/h (M = 1,64, DS = 0,57). El punto de corte entre deficientes y controles fue 3,22 nmol/ml/h, obtenido a partir de análisis ROC (99 % confianza, 100 % sensibilidad y 100 % especificidad). El protocolo permitió evidenciar la deficiencia en todos los casos de GD, confirmados mediante el análisis en paralelo de la enzima en aislamiento leucocitario. Se recomienda el uso del CBE y realizar la elución del corte a 5 mm, a fin de llevar a cabo la valoración enzimática con un volumen mayor aproximado de sangre y en ausencia de la actividad generada por la isoforma neutra.

Abstract: Gaucher disease (GD) is a lysosomal storage disorder characterized by a deficiency in the enzymatic activity of β-glucosidase (BGLU), resulting in the accumulation of glucosylceramide in cells. Its diagnosis is aimed at checking the enzyme in the affected leukocytes. Studies have been conducted on dried blood spots (DBS) for bglu activity to monitor high-risk populations; however, they exhibit interferences related to severe leukopenias or increased expression of the neutral bglu isoform, a molecule not related to gd. This study intends to standardize a screening method on dbs (punch: 5 mm) using 4-methylumbelliferyl-β-D-glucoside and conduritol-β-epoxide (CβE). dbs samples from 395 individuals clinically suspected of gd (high-risk or hr population), 151 controls, and 16 affected patients were analyzed using the elution of 5 mm punches (≈10 μl of blood) in 300 μl of Triton X-100/ (0.5 %). As a result, the following ranges were obtained; HR: 0.84-26.92 nmol/ml/h, controls: 3.56-8.92 nmol/ml/h (M = 5.56, SD = 1.15), and patients with confirmed GD: 0.82-2.88 nmol/ml/h (M = 1.64, SD = 0.57). The cut-off point between patients with gd and controls was 3.22 nmol/ml/h, obtained from roc analysis (99 % ci, 100 % sensitivity, and 100 % specificity). The protocol revealed a deficiency in all gd cases, confirmed by parallel bglu analysis in isolated leukocytes. The use of cbe and the elution of 5 mm punches are recommended for enzymatic evaluation with a higher approximate volume of blood and in the absence of neutral isoform activity.

Resumo: A doença de Gaucher (GD) é o trastorno de armazenamento lisosomal caracterizado pela deficiência na atividade enzimática da β-glucosidase (BGLU), o que produz a acumulação de glucossilceramida nas células. Seu diagnóstico está orientado à avaliação da enzima nos leucócitos afetados. Foram realizados estudos em dbs para a atividade de BGLU no seguimento de populações de alto risco; contudo, são apresentadas interferências relacionadas a leucopenias graves ou a expressão aumentada da isoforma neutra da enzima BGLU, molécula não relacionada com GD. O objetivo deste estudo foi a padronização de um método de tamisação emdbs (punch: 5 mm) com o uso de 4-metilumbeliferil-β-D- glicosídeo e conduritol-β-epóxido. Foram analisadas amostras de dbs de 395 indivíduos com suspeita clínica (população de alto risco ou ar), 151 controles e 16 pacientes afetados, usando a eluição de um corte de 5 mm (≈10 μl de sangue) em 300 μl de Tritão X-100/(0,5 %). Como resultados, foram obtidos os intervalos: AR: 0,84-26,92 nmol/ml/h, controles: 3,56-8,92 nmol/ml/h (M = 5,56, DS = 1,15) e pacientes confirmados com GD: 0,82- 2,88 nmol/ml/h (M = 1,64, DS = 0,57). O ponto de corte entre deficientes e controles foi 3,22 nmol/ml/h, obtido a partir de análise ROC (99 % confiança, 100 % sensibilidade e 100 % especificidade). O protocolo permitiu evidenciar a deficiência em todos os casos de GD, confirmados mediante a análise em paralelo da enzima em isolamento leucocitário. É recomendado o uso do cbe e a realização da eluição do corte a 5 mm, a fim de implementar a avaliação enzimática com um volume maior aproximado de sangue e em ausência da atividade gerada pela isoforma neutra.

Hormona de crecimiento en sangre de papel filtro para el diagnóstico de deficiencia de hormona de crecimiento / Growth hormone of dried blood spot for the diagnosis of growth hormone deficiency

INTRODUCCIÓN: El diagnóstico de deficiencia de hormona de crecimiento (DHC) es difícil de establecer, y se puede asociar a serias complicaciones, especialmente en el período neonatal. La prueba de estímulo de secreción de hormona de crecimiento (HC) se considera de elección para el diagnóstico, pero presenta complicaciones metodológicas y se asocia a efectos adversos. Los neonatos presentan aumento de la secreción de HC de forma fisiológica, siendo una ventana diagnóstica. OBJETIVO: Evaluar si la muestra de sangre en papel filtro tomada en el período neonatal, en contexto del tamizaje neonatal de hipotiroidismo congénito y fenilcetonuria, permite diferenciar pacientes con DHC, de los que no la presentan. PACIENTES Y MÉTODO: Estudio de casos y controles mediante determinación de concentración de HC en sangre de papel filtro extraída en período neonatal, comparando controles con DHC con casos con deficiencia descartada. Se realizó extracción de la muestra del papel filtro, obteniendo dos discos de 0,125 pulgada por cada uno de los pacientes desde el centro de la mancha de sangre del papel, para un ELISA de HC humana altamente sensible basado en el uso de anticuerpos policlonales dirigidos contra la HC humana recombinante de 22kDa de peso molecular. RESULTADOS: Se obtuvo un total de 7 casos de DHC y 10 controles. La mediana de concentración de HC de papel filtro en los casos es 2,0 ng/ml (Rango intercuartil 3,6 ng/ml) y controles 2,05 ng/mL (RIC 2,0 ng/ml), U de Mann-Withney 30,5 (p = 0,68). Los dos casos con deficiencia de hormonas hipofisarias múltiples (DHHM) presentan concentraciones menores a 1 ng/ml. CONCLUSIÓN: La muestra de papel filtro no permitió diferenciar a los pacientes con DHC de los casos controles, aunque los casos con DHHM presentaron concentraciones mucho menores, en comparación a la deficiencia de hormona de crecimiento aislada (DHCA).

INTRODUCTION: The diagnosis of growth hormone deficiency (GHD) is difficult to determine, and could be associated with severe complications, especially in the neonatal period. The stimulation test of growth hormone (GH) secretion is considered the gold standard for diagnosis, but it has methodological complications and is associated with adverse effects. Neonates present physiological increased secretion of GH, representing a diagnostic window. OBJECTIVE: To evaluate if the dried blood spot on filter paper obtained in the neonatal period, as part of a neonatal screening for con genital hypothyroidism and phenylketonuria, allows differentiating patients with GHD from those who do not have it. PATIENTS AND METHOD: Study of cases and controls by measuring the GH concen tration in dried blood spot on filter paper obtained in the neonatal period, comparing controls with GHD with cases with discarded deficiency. The sample was extracted from the filter paper, obtaining two 0.125 inch discs per each patient from the center of the blood spot on the paper, for a highly sen sitive ELISA assay for human GH based on the use of polyclonal antibodies against 22 kDa recom binant human GH. RESULTS: Seven cases of GHD and ten controls were obtained. The median GH concentration of the dried blood spot in the cases is 2.0 ng/ml (Interquartile range 3.6 ng/ml) and 2.05 ng/ml (Interquartile range 2.0 ng/ml) in the controls, Mann-Whitney U test 30.5 (p = 0.68). The two cases with multiple pituitary-hormone deficiency (MPHD) present concentrations lower than 1 ng/ml. CONCLUSION: The dried blood spot sample did not differentiate GHD patients from control cases, although MPHD cases present much lower concentrations compared to isolated growth hor mone deficiency (IGHD).

Sintomatología asociada a neurocisticercosis en personas del área urbana y periurbana del municipio de coyaima del departamento del tolima y posibles variables asociadas / Symptoms associated with neurocysticercosis in people in the urban nd peri-urban of the municipality of coyaima the department of tolima and possible associated variables / Sintomas associados a neurocisticercose em pessoas da zona urbana e peri urbana do município coyaima do departamento de tolima e variáveis associadas possíveis

Introducción: El complejo teniasis/cisticercosis es un problema de salud pública a nivel mundial. En Colombia estudios epidemiológicos evidencian la presencia de ésta parasitosis en humanos ocasionando Neurocisticercosis (NCC). Objetivo: Determinar la sintomatología asociada a Neurocisticercosis en personas del área urbana y periurbana del municipio de Coyaima del departamento del Tolima y posibles variables asociadas. Materiales y Métodos: Se realizó un estudio descriptivo de corte transversal en los habitantes del área urbana y periurbana del municipio de Coyaima en el departamento del Tolima, a quienes se les socializó un consentimiento informado. A las 159 personas que aceptaron participar voluntariamente, se les diligenció una encuesta epidemiológica estructurada, toma de 5ml de sangre periférica y simultáneamente por punción capilar sangre colectada en círculos de papel filtro de 4mm diámetro; de igual manera se solicitó una muestra coprológica que se fijó con reactivo de MIF al 5% y se procesó con la técnica de concentración de formol-éter y finalmente almacenadas a 4°C. Para la evaluación serológica, se empleó la técnica de ELISA bajo los siguientes parámetros: antígeno, fracción de 53kDa del metacéstodo de Taenia solium.; en concentración de 0,4μg/ml, dilución de suero y sangre total tomada con papel de filtro1/1, suero total 1/100 y conjugado 1/2500. El análisis estadístico incluyo tablas de contingencia de 2x2, cálculo de frecuencias y ji cuadrado. Resultados: De los 159 participante, el 17% (27/159) fueron diagnosticados seropositivos y de estos, el 67%(18/27) presentó alguna sintomatología de posible asociación con NCC. Los síntomas de mayor frecuencia en la población estudiada fueron: cefalea, 19,5%; disminución de capacidad visual, 5,7%; crisis convulsiva de aparición tardía, 4,4%; accidentes cerebrovasculares y alteración de conciencia 1,3% y 0,6%; respectivamente. Se confirmaron cuatro personas con NCC, del grupo de seropositivos (4/27) tres de género femenino y uno masculino, por técnicas de imagenología como Tomografía Axial Computarizada-TAC o Resonancia Magnética-RM. Las sintomatologías de mayor relevancia para estos pacientes fueron crisis convulsiva de aparición tardía y cefalea. La prevalencia general de parasitismo intestinal en la población participante fue del 43.3%, identificándose en el 2%(3/159) de los valorados, huevos de Taenia spp., y de estos una persona a su vez seropositiva, con sintomatología (crisis convulsiva de aparición tardía y cefalea) compatible con NCC y confirmación posterior por TAC, sugiriéndose una parasitosis mixta por el estadio adulto y el metacéstodo de T. solium.; en el paciente. Conclusiónes: El 17%(27/159) de la población estudiada fue seropositiva, se confirmaron cuatro personas por imagenología con NCC, cuyos síntomas de mayor relevancia fueron crisis convulsiva de aparición tardía y cefalea. El género femenino es proclive a sufrir la parasitosis. Se halló presencia de huevos de Taenia. spp.; en el 2% de la población participante en el estudio. La variable fuentes de agua para consumo presento significancia estadística p≤ 0,05.

Introduction: The complex teniasis/cysticercosis is a worldwide public health problem. Colombia epidemiological studies shows the presence of parasites in humans resulting in neurocysticercosis (NCC). Objective: To determine the symptoms associated with neurocysticercosis in people in the urban and peri-urban area of the town of Coyaima in the Department of Tolima and possible associated variables. Materials and methods: a descriptive cross-sectional study was performed in the inhabitants of the urban and peri-urban area of the town of Coyaima in the Department of Tolima, who socialized informed consent. The 159 people that they agreed to participate voluntarily, is filled them a structured epidemiological survey, 5ml of blood making peripheral and simultaneously by finger stick blood collected in 4mm diameter filter paper circles; Similarly be asked a coprological sample that was set with MIF reagent to 5% and was processed with the concentration of formol-eter technique and finally stored at 4°C. Serologic evaluation, used the ELISA technique under the following parameters: Antigen fraction of 53kDa of the metacestodo of Taenia solium.; concentration of 0,4μg/ml, dilution of serum and whole blood taken with filter1/1, total serum conjugated 1/2500 and 1/100 paper. Statistical analysis included calculation of frequencies and Chi square 2 x 2 contingency tables. Results: Of 159 participants, 17%(27/159) were diagnosed positive, and of these, 67%(18/27) presented any symptoms of possible partnership with NCC. Symptoms of greater frequency in the population studied were: headache, 19.5%; decrease of visual acuity, 5.7%; late-onset seizure, 4.4%; accidents cerebrovascular and alteration of consciousness 1.3% and 0.6%; respectively. Confirmed four people with NCC, of the positive Group(4/27) three female and one male, by techniques such as tomography Axial-TAC or magnetic resonance-MRI Imaging. The symptomatology of greatest relevance for these patients was seizure of late-onset and headache. The overall prevalence of intestinal parasitism in the participant population was 43.3%, identified in the 2%(3/159) rated, eggs of Taenia spp.; and of these a person positive turn, with symptoms (seizure of late-onset and headache) compatible with NCC and subsequent confirmation by TAC, suggesting a mixed parasitic infections by the adult stage and the metacestodo of T. solium.; in the patient. Conclusions: 17%(27/159) of the studied population was positive, four persons were confirmed by imaging with NCC, whose symptoms of greater importance were seizure of late-onset and headache. The feminine gender is prone to suffer parasitosis. We found the presence of eggs of Taenia. spp.; in 2% of the population participating in the study. The variable sources of water for consumption presented statistical significance p≤ 0.05.

Introdução: O complexo teníase / cisticercose é um problema de saúde pública mundial. Estudos epidemiológicos na Colômbia mostram a presença de parasitasem seres humanos resultando em neurocisticercose (NCC). Objetivo: Determinar os sintomas associados à neurocisticercose em pessoas na área urbana e peri-urbana da cidade de Coyaima no Departamento do Tolima e possíveis variáveis associadas. Materiais e métodos: Um estudo descritivo transversal foi realizado nos habitantes da área urbana e peri-urbana da cidade de Coyaima, no Departamento do Tolima, que socializou o consentimento informado. As 159 pessoas que concordaram em participar voluntariamente, e preenchido um inquérito epidemiológico estruturado, 5 ml de sangue fazendo periférico e simultaneamente por sangue de vara de dedo coletado em círculos de papel de filtro de 4 mm de diâmetro; Do mesmo modo, ser-lhe-á solicitada uma amostra coprológica que foi fixada com reagente MIF a 5% e processada com a concentração de formol-eter e finalmente armazenada a 4 ° C. A avaliação sorológica utilizou a técnica ELISA sob os seguintes parâmetros: Fração de antígeno de 53kDa do metacesto de Taenia solium, concentração de 0,4μg / ml, diluição de soro e sangue total coletado com filtro1/1, soro total conjugado com 1/2500 e 1/100 de papel. A análise estatística incluiu o cálculo de frequências e tabelas de contingência Chi 2 x 2. Resultados: Dos 159 participantes, 17% (27/159) foram diagnosticados positivos, e destes, 67% (18/27) apresentaram qualquer sintoma de possível parceria com a NCC. Os sintomas de maior freqüência na população estudada foram dor de cabeça, 19,5%; Diminuição da acuidade visual, 5,7%; Ataque tardio, 4,4%; Acidentes vasculares cerebrais e alteração da consciência 1,3% e 0,6%; respectivamente. Confirmou quatro pessoas com NCC, do grupo positivo (4/27) três do sexo feminino e um do sexo masculino, por técnicas como a tomografia Axial-TAC ou ressonância magnética-Imaging RM. A sintomatologia de maior relevância para estes pacientes foi a convulsão de início tardio e dor de cabeça. A prevalência total de parasitismo intestinal na população participante foi de 43,3%, identificados nos 2% (3/159) avaliado, ovos de Taenia spp., e destes, por sua vez, uma pessoa positiva, com sintomas (apreensão de início tardio e dor de cabeça) compatível com NCC e subsequente confirmação por TAC, sugerindo uma mistos infecções parasitárias por a etapa de adultos e o metacestodo de T. solium., no paciente. Conclusões: 17% (27/159) da população estudada foi positiva, quatro pessoas foram confirmadas por imagem com NCC, cujos sintomas de maior importância foram apreensão de início tardio e cefaléia. O sexo feminino é propenso a sofrer parasitose. Encontramos a presença de ovos de Taenia spp., em 2% da população participante do estudo. As fontes variáveis de água para consumo apresentaram significância estatística p≤ 0,05.

Blood collection on filter paper for HIV antibodies detection: experience of SampaCentro Project / Colheita de sangue em papel filtro para detecção de anticorpos anti-HIV: experiência do Projeto SampaCentro

Introduction: Blood samples collected on filter paper (dried blood spot [DBS]) is an immunoassay that has been used for antibodies screening. Objective: To evaluate the strategy of DBS blood collection for detection of HIV antibodies, evaluation of Q-Preven HIV 1 + 2 - DBS kit lot, and to analyze the stability of DBS samples. Methods: Blood collection on DBS was performed according to World Health Organization (WHO) recommendations. The evaluation of the kit lot for HIV antibodies detection was performed using delta (d) values from the results of 774 DBS samples from volunteers men who have sex with men (MSM) recruited in the central region of São Paulo city, Brazil. Results: DBS blood collection was performed without complications. The positive (5.26) and negative (5.23) delta values allowed to clearly differentiate HIV antibodies reactive and non-reactive samples. We observed good performance of the kit lot and samples were stable on DBS form. Conclusion: Blood collection on DBS is feasible for the study of MSM population and is suitable for laboratory routine. The overall performance of Q Preven HIV-1 + 2 - DBS kit was satisfactory, having reached the quality levels required for the development of this study. .

Introdução: As amostras de sangue colhidas em papel filtro (DBS) têm sido utilizadas na triagem de anticorpos por meio de imunoensaios. Objetivos: Avaliar a estratégia de colheita de sangue em DBS para detecção de anticorpos contra o vírus da imunodeficiência humana (HIV), verificar o lote do kit Q-Preven HIV 1+2 - DBS e analisar a estabilidade das amostras DBS. Métodos: A colheita de sangue em DBS foi realizada conforme recomendações da Organização Mundial da Saúde (OMS). A avaliação do lote do kit para detecção de anticorpos anti-HIV foi feita por meio do valor de delta a partir dos resultados das 774 amostras DBS provenientes de voluntários homens que fazem sexo com homens (HSH) recrutados na região central da cidade de São Paulo, Brasil. Resultados: A colheita de sangue em DBS foi realizada sem intercorrências. O indicador delta positivo (5,26) e negativo (5,23) permitiu discriminar com clareza amostras anti-HIV reagentes e não reagentes. O lote do kit apresentou bom desempenho e as amostras permaneceram estáveis na forma de DBS. Conclusão: A colheita de sangue em DBS mostrou-se factível para o estudo realizado com a população HSH e foi adequada para a rotina laboratorial. O desempenho global do kit Q-Preven HIV 1+2 - DBS foi satisfatório, com a qualidade requerida para o desenvolvimento deste estudo. .